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Pedro M Santos1, Miguel C Teixeira1 e Isabel Sá Correia1,2
1Grupo de Ciências Biológicas, Centro de Engenharia Biológica e Química, 2Departamento de Engenharia Química, Instituto Superior Técnico.
Com a sequenciação dos genomas de diversos organismos modelo, tornou-se praticável a análise da expressão genómica (todos os genes expressos a partir do genoma) que contrasta com a abordagem clássica, gene a gene. A análise da expressão global através do proteoma (todas as PROTEínas expressas do genOMA) permite revelar proteínas (ou genes codificantes) envolvidas em processos dinâmicos que ocorrem após a perturbação de um dado estado fisiológico, através da comparação da sua concentração celular antes e após essa perturbação. A monitorização do nível das proteínas, através de proteómica quantitativa (também conhecida por proteómica comparativa), permite apreciar o efeito da regulação da expressão genética que ocorre pós-transcrição e pós-tradução e fornece numerosas pistas quanto à sua função biológica e envolvimento nos processos biológicos examinados.
Neste portal, pretende-se divulgar a técnica de electroforese bi-dimensional, dando a conhecer algumas das suas condicionantes e potencialidades (1. Introdução). Descreve-se em detalhe a abordagem experimental utilizada no nosso grupo em estudos de proteómica quantitativa, incluindo dicas sobre como proceder à preparação de amostras, focagem isoeléctrica, SDS_PAGE, detecção e quantificação de proteínas e identificação das mesmas (2. Abordagem experimental). Por fim descrevem-se dois casos de aplicação desta metodologia em estudos de resposta ao stresse em microorganismos (3. Exemplos de aplicação à investigação em microbiologia) e apresentam-se os mapas de referência dos proteomas de Saccharomyces cerevisiae BY4741 e Pseudomonas putida KT2440 obtidos durante estes estudos. Salienta-se, em particular, que o mapa apresentado para o proteoma de Pseudomonas putida KT2440 é o mais completo que foi disponibilizado até ao momento para este organismo modelo.
Introdução e organização de conteúdos: Joana Camilo e Nuno Mira
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